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- 上海滬崢生物科技有限公司
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雞傳染性貧血病毒PCR檢測試劑盒
- 品牌：上海滬崢
- 產(chǎn)地：國內(nèi)
- 型號：50T/盒
- 貨號：HZT2455
- 價格： ￥2380/盒
- 發(fā)布日期： 2021-03-25
- 更新日期： 2025-01-06
產(chǎn)品詳請
| 產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZT2455 |
| 用途 | 僅用科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
基本原理 先用隨機引物將 RNA 反轉(zhuǎn)錄成 cDNA，然后設計特異性的引物和熒光探針(TaqMan 探針),進行 熒光定量 PCR 檢測。TaqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它設計為與目標序列上游引物和下游引物 之間的序列配對。熒光基團連接在探針的 5’末端，而淬滅劑則在 3’末端。當完整的探針與目 標序列配對時，熒光基團發(fā)射的熒光因與 3’端的淬滅劑接近而被淬滅，但在進行延伸反應時， qTaq 聚合酶的 5’外切酶活性將探針進行酶切，使得熒光基團與淬滅劑分離,熒光強度得到檢測。 隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累，因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關系。
試劑盒準備物品：
清理液（A） 毫升
染色液（t B） 微升
稀釋液（C） 毫升
溶解液（tD） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
雞病毒PCR檢測試劑盒注意事項：
注意事項:
1. 試劑盒各組份使用前請充分融化并搖勻,離心管內(nèi)的試劑需離心數(shù)秒后使用。 2 PCR操作各階段應在不同實驗室進行。
3 在試劑和標本準備階段使用負壓超凈臺。
4 應穿工作服，戴一次性手套（經(jīng)常替換手套），使用一次性用品。
5 PCR操作人員應具有經(jīng)驗和受過培訓。
6操作過程中用到的超凈臺、移液器、離心機、擴增儀等儀器設備應經(jīng)常用10%次氯酸或70%乙醇或 紫外燈處理。
7 陽性對照應和待檢標本平行進行操作后方可進行PCR擴增。
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